Ocorrência de resultados falso-negativos na reação de PCR em Tempo Real (PCR-TR) no diagnóstico da doença meningocócica

Resumo

Foram investigados os fatores que causam resultados falso-negativos (RF-N) nas reações de PCR-TR nodiagnóstico de N. meningitidis em amostras de soro e LCR. Considerando-se que a doença meningocócica devaser rapidamente tratada pela alta letalidade e potencial epidêmico, o RF-N no ensaio diagnóstico pode ocasionarfalhas no tratamento e/ou na contenção da doença na comunidade. Portanto, é importante elucidar os fatoresque induzem RF-N na PCR-TR. Os RF-N ocorreram em virtude de inibição, baixa quantidade de DNA-alvonas preparações de DNA e inadequada temperatura no procedimento de anelamento. Por ser altamente variávela concentração de DNA bacteriano em amostras clínicas, não foi possível definir o volume ideal de amostraa ser extraído. A temperatura a 60°C para anelamento, recomendada para genogrupagem de N. meningitidispor PCR-TR, não foi adequada para genogrupos B e W135. Estes fatores ocasionaram a indução de RF-N em31 amostras; consequentemente, 30% das bactérias detectadas pelo PCR-TR foram classificadas como nãogenogrupáveis. Inibidores e/ou baixa quantidade de DNA-alvo induzem RF-N, independentemente do volumede amostra utilizada na extração de DNA; entretanto, ajustes na temperatura de anelamento e na quantidade deamostra extraída adicionada na reação podem evitar a maioria destes RF-N.